尿素含量测定：临床检验与卫生检验的重要指标及方法研究

尿素含量测定：临床检验与卫生检验的重要指标及方法研究

——尿素是一项重要的检测指标，在很多领域都需要测定样本中的尿素含量才能了解其含量，目前的研究主要集中在两个方面： ※临床检验 ※卫生学检验 临床检验 尿素测定是临床诊断、观察各类肾脏疾病的重要指标，最常用的方法是：二乙酰一肟法。 原理：在酸性反应环境中加热，尿素与二乙酰缩合生成色素衍生的二嗪化合物。由于二乙酰不稳定，二乙酰一肟通常与反应体系中的强酸反应生成二乙酰，二乙酰再与尿素反应缩合为红色的二嗪化合物(反应)[1]。二乙酰一肟 二乙酰羟胺二乙酰 反应方程式： 尿素二嗪化合物（红色） (4,5-二甲基-2-咪唑酮) 步骤 表1 二乙酰一肟比色法操作步骤 [1] 添加剂 试管 标准管 空白管 二乙酰一肟溶液 0.5 0.5 0.5 酸试剂（ml） 555 血清（ml） 0.02 -- 尿素标准应用溶液-0.02 -- 蒸馏水（ml） --0.02 混合后，在沸水浴中加热12分钟，取出，在冷水中冷却5分钟，用分光光度计在540nm处，调节空白管为零，读取标准管和试管的吸光度。 卫生检验 在卫生检验方面，可用于掺假食品中的尿素检验，也可用于肥料中尿素的检验。重点针对的是泳池水中尿素的检测，泳池水中尿素检测属于公共场所卫生检测，有国家规定的标准检测方法：二乙酰单肟安替比林法（GB/T29-2000）。

原理：尿素与二乙酰一肟和安替比林反应生成黄色，最大吸收峰在波长460nm处。 步骤1. 移取10mL水样（尿素含量在0.001～0.015mg范围内）于25mL棕色具塞试管中。 取另一只棕色具塞试管，分别加入尿素标准溶液：0、0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3、1.5mL，并用纯水稀释至25mL。 2. 向上述各管中加入1.0mL二乙酰一肟溶液，混匀。 加入2.0mL安替比林溶液，混匀。 3. 将上述试管在沸水浴中加热50min，取出并在流动的自来水中冷却2min。立即以纯水为对照，用1cm比色皿在460nm处测定各管吸光度（加热45~55min，颜色最深，若延长时间，吸光度会降低）。4.将吸光度与浓度进行比较，制作标准曲线，利用水样吸光度从曲线上查出尿素含量。临床与卫生检验中二乙酰一肟法测定尿素​​的区别 项目 临床检验 卫生检验 方法名称 二乙酰一肟法 二乙酰一肟安替比林法 显色颜色 红色 黄色 吸光度 比色波长 试剂瓶要求 无特殊要求 棕色带盖比色管 无需稀释样品，根据稀释倍数计算原样中尿素浓度 加热时间短，10-15分钟 较长时间为45-55分钟 二乙酰一肟法研究进展 二乙酰反应又称二乙酰反应，因1939年首次报道，故又称反应。

该反应最初涉及尿素与二乙酰的反应，但因为二乙酰溶液不稳定，常采用二乙酰一肟作为该反应的基础试剂。研究进展如下：在临床检测方面：多数基层医院仍在采用二乙酰一肟法，但该法存在诸多弊端，易使实验结果产生误差，可加以改进。1.采用低浓度二乙酰一肟比色剂及内置搁板的恒温水浴显色，并校正回收率，从而明显提高准确度[2]；2.56℃保温测定法[3]；3.改进试剂配方，使其在室温下能长期稳定，防止变黄或浑浊[4]；4.加入一定浓度的硫胺素尿素及金属离子，可提高反应溶液和试剂的稳定性，增加反应灵敏度。例如加入硫胺素尿素和Fe3+，不仅能改善和稳定产品颜色，还能去除生成的羟胺。1.将沸水浴时间由50 min增加至20 min[5]；2.由于反应所用的带塞比色管不易买到，可用黑色塑料袋套住的普通透明比色管代替棕色比色管[6]；3.扩大标准曲线，将固定体积由25 ml改为10 ml，并加入稳定剂异丙醇，以拓宽线性范围，提高吸光度值[7]。在卫生检验领域： 参考文献 [1]李应林，中华医学检验手册第一版，人民卫生出版社，1996，698 [2]潘忠孝，狄秋元，高秉德，王洪兰，血清尿素测定-二乙酰一肟改进法，中国医科大学学报，1988，17（3） [3]徐志毅，二乙酰一肟56℃保温法测定血清尿素氮，临床检验杂志，1988，6（4） [4]冯景池，尹继群，马树臣，二乙酰一肟改进法测定血清尿素氮，中国医科大学学报，1988，17（3） [5]徐志毅，二乙酰一肟56℃保温法测定血清尿素氮，临床检验杂志，1988，6（4） [6]冯景池，尹继群，马树臣，二乙酰一肟改进法测定血清尿素氮，中国医科大学学报，1988，17（3）尿素，河北医科大学学报，1998，19（5） [5]汪益平，陈海红，沈仁富，陈锦斌，陈宇红，二乙酰一肟分光光度法测定游泳池水中尿素含量，中国卫生监督杂志，2012，22（3） [6]刘晨阳，张美君，透明比色管在尿素测定中的应用，环境与健康杂志，1999，16（2） [7]张雪梅，游泳池水中尿素检测方法的改进，中国卫生监督杂志，2009，19（10）