细菌基因组 DNA 提取试剂盒（离心柱法）：产品介绍与特点

细菌基因组 DNA 提取试剂盒（离心柱法）：产品介绍与特点

细菌基因组DNA提取试剂盒（旋转柱法）

DNA试剂盒()

包装规格：

D2512-50

细菌基因组DNA提取试剂盒（旋转柱型）

50次

500元

D2512-100

细菌基因组DNA提取试剂盒（旋转柱型）

100次

860元

D2512-200

细菌基因组DNA提取试剂盒（旋转柱型）

200次

1680元

一、产品介绍：

独特的结合液/蛋白酶K快速裂解细胞并灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高解离盐状态下选择性吸附到旋转柱中的硅基质膜上，然后经过一系列快速漂洗和离心步骤。 、抑制剂去除液和冲洗液去除细胞代谢物、蛋白质和其他杂质，最后低盐洗脱缓冲液从硅基质膜上洗脱出纯的基因组DNA。

2、产品特点：

1、离心吸附柱中的硅基质膜采用进口公司生产的专用吸附膜。柱间吸附容量差异极小，重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的缺点。

2、不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

3、快速简单，单个样品操作一般可在30分钟内完成。

4. 多次柱冲洗确保高纯度。 OD260/OD280的典型比值为1.7~1.9，长度可达30kb -50kb。可直接用于PCR、-blot及各种酶切反应。

三、适用范围：

适用于快速提取多种细菌基因组DNA。

4、储存条件：

1、结合液CB或抑制剂去除液IR在低温下可能会沉淀、沉淀。可在37°C水浴中再溶解几分钟。恢复澄清透明后，冷却至室温即可使用。

2. 为了避免活性降低和便于运输，蛋白酶K以冻干粉的形式提供。收到后可短暂离心，然后加入1ml无菌水溶解。由于反复冻融可能会降低酶的活性，因此应立即溶解。根据每次使用量（20 μl）等分并冷冻，-20°C保存。

3、避免试剂长期暴露在空气中引起挥发、氧化、pH值变化。每种溶液使用后应盖紧瓶盖。

5、注意事项：

1.所有离心步骤均在室温下完成，使用传统台式离心机，转速可达13，如5415C或类似离心机。

2、开始实验前，根据需要将水浴预热至37℃或70℃。

3. 异丙醇需要您自己准备。

4.您需要自己准备0.5M EDTA、X-100和（溶菌酶）（针对革兰氏阳性菌）。

5、结合液CB和抑制剂去除液IR含有刺激性化合物。操作时戴乳胶手套，避免污染皮肤、眼睛和衣服。如果污染皮肤或眼睛，请用大量水或生理盐水冲洗。

洗脱液EB不含螯合剂EDTA，不影响下游酶消化、连接等反应。也可以用水进行洗脱，但应保证批次pH大于7.5。 pH值太低会影响洗脱效率。用水洗脱的 DNA 应保存在 -20°C 下。如果DNA需要长期保存，可以用TE缓冲液（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0）洗脱。但EDTA可能会影响下游酶切反应，因此使用时可适当稀释。

6、操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

提示：首次使用前，请在冲洗液WB中加入规定量的无水乙醇并充分混匀。添加后请及时勾选方框，标记乙醇已添加，避免多次添加！

1、取细菌培养液0.5-2ml（最多不超过2×109个细胞），离心10秒30秒，尽可能弃去上清，收集细菌。

初始处理量可以根据细菌密度、细胞类型和预期产量进行调整。但离心吸附柱的最大吸附容量为20μg基因组DNA。如果细菌细胞超过最大吸附能力，产量就会严重降低。

2.加入200μl缓冲液RB重悬，10，离心30秒，弃上清。彻底摇匀或吸取细胞，将其重悬于 180 μl 缓冲液 RB 中。

注：对于难以破壁的革兰氏阳性菌，可以跳过步骤2，加入溶菌酶破壁。具体方法为：加入180μl缓冲液（20mM Tris，pH 8.0；2mM Na2-EDTA；1.2%X-100；临用前添加至终浓度为20mg/ml溶菌酶（溶菌酶必须由溶解溶菌酶制备而成）缓冲液中的干粉，否则溶菌酶将失去活性），37℃处理30分钟以上。

3. 加入20 μl蛋白酶K（20 mg/ml）溶液，充分混匀，然后加入200 μl结合液CB，立即涡旋混匀，70℃放置10分钟。

可选步骤：如果RNA残留较多，需要去除RNA，可先加入4μl RNase A（100mg/ml）溶液，然后加入200μl结合液CB，摇匀混匀，室温放置5- 10 分钟。

4. 冷却后，加入100μl异丙醇，立即涡旋混匀。此时可能会出现絮状沉淀。

在上述步骤中，立即涡旋或移液器充分混匀非常重要。混合不充分会严重降低产量。如有必要，如果样品粘稠且难以混合，可以涡旋15秒进行混合。

5、将上一步的混合物（包括可能的沉淀）加入到吸附柱AC中（将吸附柱置于收集管中），13,离心30-60秒，倒出收集管中的废液。

6. 加入 500 μl IR，12,000 rpm 离心 30 秒，弃去废液。

7、加入600μl冲洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇！），12,离心30秒，弃去废液。

8. 加入 600 μl 冲洗液 WB，12,000 rpm 离心 30 秒，弃去废液。

9. 将吸附柱AC放回空收集管中，13,离心2分钟。尽可能多地去除冲洗液，以避免冲洗液中残留的乙醇抑制下游反应。

10、取出吸附柱AC，放入干净的离心管中，加入100μl洗脱缓冲液EB至吸附膜中部（洗脱缓冲液提前在65-70℃水浴中预热更好） ，室温放置3-5分钟，12,离心1分钟。将所得溶液加回离心吸附柱中，室温放置2分钟，离心1分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高。如果需要较高的DNA浓度，可适当减少洗脱体积，但最小体积不应低于30μl。如果体积太小，DNA洗脱效率会降低，DNA得率也会降低。

11.DNA可在2-8℃保存。如需长期保存，可置于-20℃。