计数器测定法、电子计数器计数法与活细胞计数法的特点与应用

计数器测定法、电子计数器计数法与活细胞计数法的特点与应用

1、计数器测量方法：

即，使用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室中，用显微镜观察并计数。由于计数室的容积是固定的（O.1mm3），根据计数刻度内的细菌数即可计算出样品中的细菌数。该方法简单易行，可立即得出结果。

该方法不仅适用于细菌计数，也适用于酵母菌和霉菌孢子的计数。

2、电子计数器计数方式：

电子计数器的工作原理是测量小孔内液体的电阻变化。小孔只能穿过一个细胞。当细胞穿过小孔时，电阻显着增加，形成脉冲，自动记录在电子记录装置上。

该方法测量结果较为准确，但仅识别颗粒大小，无法区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含有任何碎片。

3.活细胞计数方法

常用的平板菌落计数方法是根据每个活细菌都能生长一个菌落的原理设计的。取一定体积的菌悬液，进行一系列倍倍稀释，然后将定量稀释液进行平板接种。根据培养菌落的数量，可以计算培养物中活细菌的数量。该方法灵敏度高，是一种检测活污染细菌数量的方法。这也是目前世界上许多国家所采用的方法。使用该方法时应注意： ① 一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。菌落过多或过少都会不准确； ②为防止菌落扩散，影响计数，可在培养基中添加O.。 001% 2,3,5 一氯化三苯基四唑（TTC）； ③ 该方法仅限于形成菌落的微生物。

广泛应用于水、牛奶、食品、药品等各种物质的细菌检测，是最常用的活菌计数方法。

4. 比浊法

比浊法根据细菌悬浮液的透光率间接测定细菌的数量。菌悬液的浓度在一定范围内与透过率成反比，与光密度成正比。因此，可以采用光电比色计来测量菌液，并用光密度（OD值）来表示样品菌液的浓度。

该方法简单、快速，但只能检测含有大量细菌的悬浮液并获得细菌的相对数量。此方法不能用于测定颜色太深的样品。

5. 细胞重量测定方法

该方法分为湿重法和干重法。对于湿重法，将单位体积培养物离心并称重湿细菌细胞；干重法是将单位体积培养物离心，用清水洗涤，置于干燥器中，加热干燥失去水分后称重。

该方法适用于细菌浓度高的样品，是测定丝状真菌生长情况的常用方法。

6.测定细胞的总氮或总碳含量

氮和碳是细胞的主要成分，其含量相对稳定。测量氮和碳的含量可以推断细胞的质量。该方法适用于细胞浓度较高的样品。

7、换色单元法（简称CCU）

这种方法通常用于非常小的、一般比浊法无法计数的微生物，如支原体。由于支原体液体培养物完全透明，呈澄清透明红色，因此不能用比浊法进行计数。由于支原体固体培养困难，不易用CFU法进行计数，因此需要一种特殊的计数方法——CCU法。它以培养基中微生物的代谢活性为指标，统计微生物的相对含量。下面以解脲支原体为例，简单介绍其操作：

(1).取12支无菌试管，每支管中加入1.8ml解脲脲原体培养基。

（2）。将待测解脲支原体菌液0.2ml加入第一管中，混匀，从中吸取0.2ml加入第二管中，以此类推，10倍梯度稀释，直至最后一管

（3）。 37度培养，以最后一根培养基颜色发生变化的管作为待测菌液的CCU，即为支原体的最大代谢活性。例如，如果第六管的颜色发生变化，则其相对浓度为10。6次方CCU/ml。

一般来说，比浊法和菌落计数法可以满足大多数细菌的计数，但对于支原体等特殊微生物，CCU法更适合。

有许多测量微生物生长的方法。每种方法都有其自身的优点和缺点，并且并不适合所有情况。微生物工作中常用的有平板菌落计数法、计数法和比浊法。至于哪种方法更适合你，就看你的具体情况了。