过氧化物酶试剂盒说明书：微量法测定意义、原理及组成

过氧化物酶试剂盒说明书：微量法测定意义、原理及组成

过氧化物酶 （POD） 试剂盒说明

微量法 100 管/96 份样品

在正式测量之前，需要取 2-3 个预期差较大的样本进行预测

决定的意义：

POD（EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，能催化氢氧化物氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类毒性的双重作用。

测定原理：

POD 催化 H2O2 氧化特定底物，在 470 nm 处具有特征光吸收。

组成：

产品名称

SR007-100T/96S 系列

提取物：液体

100 毫升

4°C

试剂 1：液体

25 毫升

4°C

试剂 2：液体

100 微升

4°C

试剂 3：液体

100 微升

4°C

说明书

一份

自备仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调移液器、微量石英比色皿/96 孔板、砂浆、冰和蒸馏水

粗酶溶液提取：

1. 细菌、细胞或组织样品的制备

细菌或培养的细胞：先将细菌或细胞收集到离心管中，离心后弃去上清液;按细菌或细胞数（104个）：提取体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万个细菌或细胞加入1ml提取液），超声粉碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）;在 4°C 下以 8000g 离心 10 min，取上清液，置于冰上检测。

组织：按组织质量（g）的比例：提取体积（ml）至1：5~10（建议称取组织约0.1g，加入1ml提取物），在冰浴中匀浆。在 4°C 下以 8000g 离心 10 min，取上清液，置于冰上检测。

2.血清（果肉）样品：直接检测。

检测步骤：

1. 将分光光度计或酶标仪预热 30 分钟以上，将波长调节至 470nm，并将蒸馏水调至零。

2. 准备工作

工作液：使用前，将试剂1、试剂2和试剂3按2.6（ml）：1.5（μl）：1（μl）的比例混合，在37°C（哺乳动物）或25°C（其他物种）下预热10min以上;

3. 向微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10 μl 样品和 190 μl 工作溶液，充分混合，并记录 470 nm 处的吸光度值 A1 1 分钟 和 2 分钟后的吸光度值 A2。计算 ΔA=A2-A1。

注意：

如果 ΔA 小于 0.005，则反应时间可以延长至 5 min。如果 ΔA 大于 0.5，则可以用提取物稀释样品，然后乘以计算公式中相应的稀释因子。

POD 活动计算：

这

用微石英比色皿测定的公式如下

1. 血清（果肉）POD 活性

单位定义：每分钟每毫升血清 0.01 个血清（果肉） A470 变化量每毫升反应系统作为一个酶活性单位。

计算公式：

POD （U/ml） = ΔA×V 逆总÷ V 样÷ 0.01÷T = 2000×ΔA

2. 组织、细菌或细胞的 POD 活性

（1） 根据样品的蛋白质浓度计算

单位定义：每分钟每毫克组织蛋白 0.01 A470 在每 ml 反应系统中变化为一个单位的酶活性。

POD（U/mg prot） = ΔA×V 逆总÷ （V-like×Cpr） ÷0.01÷T = 2000×ΔA÷Cpr

（2） 按样品鲜重计算

单位定义：反应系统中每毫升组织每分钟 0.01 的 A470 变化，作为酶活性的一个单位。

POD（U/g 鲜重） = ΔA×V 逆总 ÷（W× V 样品 ÷ V 样品总计） ÷ 0.01÷T = 2000×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算

单位定义：每 10,000 个细菌或细胞每毫升反应 0.01 的 A470 变化是一个单位的酶活性。

POD（U/104 电池）= ΔA×V 抗总÷（500×V 样品÷ V 样品总数）÷0.01÷T = 4×ΔA

V 抗全：反应系统的总体积，0.2ml;V-：加入样品体积，0.01ml;总 V 样品：加入 1 ml 提取的液体;T： 反应时间，1 min;CPR：样品蛋白浓度，mg/ml;W： 样本质量;500：细菌或细胞的总数，500 万。

这

96 孔板的分析公式如下

1. 血清（果肉）POD 活性

单位定义：反应系统中每毫升血清（果肉）中 A470 每分钟 0.005 的变化是酶活性的一个单位。

POD （U/ml） = ΔA×V 逆总÷ V 样 ÷0.005÷T = 4000×ΔA

2. 组织、细菌或细胞的 POD 活性

（1） 根据样品的蛋白质浓度计算

单位定义：每分钟每毫升组织蛋白 0.005 每毫升反应系统 A470 变化作为酶活性的一个单位。

POD（U/mg prot） = ΔA×V 抗总÷（V 样 ×Cpr） ÷0.005÷T = 4000×ΔA÷Cpr

（2） 按样品鲜重计算

单位定义：每毫升组织每分钟 0.005 的 A470 变化是酶活性的一个单位。

POD（U/g 鲜重）= ΔA×V 抗总÷（W× V 样品÷ V 样品总数）÷0.005÷T = 4000×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算

单位定义：每分钟 0.005 个 A470 的变化每 10,000 个细菌或细胞每毫升反应是一个单位的酶活性。

POD（U/104 电池）= ΔA×V 抗总÷（500×V 样品÷ V 样品总计）÷0.005÷T = 8×ΔA

V 抗全：反应系统的总体积，0.2ml;V-：加入样品体积，0.01ml;总 V 样品：加入 1 ml 提取的液体;T： 反应时间，1 min;CPR：样品蛋白浓度，mg/ml;W： 样本质量;500：细菌或细胞的总数，500 万。

供应：荧光定量PCR耗材、细胞培养、核酸提取耗材、试剂包装、生物试剂、色素、原料、抗原抗体、试剂盒等，通用耗材包括深孔板、96孔硅胶垫、吸头、密封膜、载玻片、试管、量杯、试剂槽、离心管、移液管等。