益生菌微胶囊化：提高耐酸性，发挥益生功效的关键技术

益生菌微胶囊化：提高耐酸性，发挥益生功效的关键技术

益生菌是一类对人体健康有益的活微生物。适量摄入有助于调节肠道微生态平衡，有利于肠道健康[1-2]。益生菌定植的肠道活菌数量不少于106 CFU，这是其发挥益生菌功效的必要前提。人体摄入益生菌后，益生菌的活性很容易受到人体胃消化系统低pH值的影响，最终会达到并且定植肠道的益生菌数量大大减少，不足以发挥相应的益生菌功效[3-4]。

目前，产品的耐酸性主要是通过微胶囊化益生菌来提高。根据不同包埋材料对益生菌的不同保护原理，包埋材料分为：蛋白质、多糖和纤维素[5-7]。在低于等电点的pH环境下，蛋白质会暴露大量疏水基团并与细菌紧密结合，延缓H+的渗透。目前，益生菌通常通过乳化、复合凝固、喷雾干燥等工艺嵌入[8 -9]。多糖很容易与Ca2+等金属离子交联，形成三维网络结构。在其中嵌入益生菌可以阻止H+的渗透并维持凝胶内部的pH环境。微囊益生菌通常通过挤出和乳化等工艺制备[10-12]。纤维素在pH为2.0～3.0的环境中容易沉淀，形成不溶性沉淀。它不仅可以嵌入益生菌，还可以保护它们。

现有的封装方法虽然可以在一定程度上提高益生菌的耐酸性，但产品均为湿式微胶囊，含水量较高，不方便储存，限制了产品的应用。目前常用的干燥方法有风干、喷雾干燥、冷冻干燥等。但风干和喷雾干燥过程温度较高，会大大降低益生菌的活性。冷冻干燥过程虽然也存在一定的活性损失，但远低于其他干燥过程[13]。本文采用耐酸材料，并与相应的冻干保护剂混合，减轻冻干和酸性环境对益生菌的损害，提高益生菌冻干粉的冻干存活率和耐酸性，维持益生菌的生物活性。

1 材料与方法 1.1 材料与试剂

1.1.1 细菌

干酪乳杆菌（casei）CCFM 711，江南大学食品生物技术中心保藏。

1.1.2 试剂

金龙鱼一级大豆油，欧尚超市；酪蛋白酸钠、胃蛋白酶、羧甲基纤维素钠（DS 0.9）、海藻酸钠、CaCO3、NaCl等均为分析纯，MRS培养基；麦芽糖糊精、水苏糖、分离乳清蛋白、脱脂奶粉、。

1.2 仪器设备

GRP-9080防水恒温培养箱、FE20 pH计、电子天平、MS 3基本涡旋振荡器、MLS-3750高温高压灭菌器、ZHJH型超净工作台、； 5PS冷冻干燥机，西班牙公司。

1.3 实验方法

1.3.1菌悬液的制备

取-80℃保存的干酪乳杆菌CCFM 711甘油保存管，4℃解冻。将接种环浸入保存液中并在 MRS 平板上划线。 37°C 孵育 24 小时。在平板上挑取单个菌落并接种。 5 mL MRS液体培养基中，37℃孵育12小时，活化至第三代，扩大培养物，接种至体积分数4%，37℃孵育12小时，4℃离心8 000×g 20 min后，除去上清液，收集菌泥，加入适量生理盐水使菌悬液中菌泥质量浓度为500 g/L，混匀，调节pH至6.5左右，并放在一边。

1.3.2冻干保护剂的制备

称取糖冻干保护剂(麦芽糊精、菊粉、抗性糊精、赤藓糖醇、海藻糖、水苏糖)，分别溶解于去离子水中，使各保护剂溶液的质量浓度为100 g。 /L，115℃高压灭菌20分钟，冷却后4℃保存备用。

分别称取蛋白质冻干保护剂（大豆分离蛋白、明胶、脱脂奶粉、豌豆蛋白、鹰嘴豆蛋白、花生蛋白、核桃蛋白），溶解于去离子水中。保护剂溶液的质量浓度为100g/L。 ，65℃灭菌30分钟，冷却后4℃保存备用。

将V（冻干保护剂溶液）：V（菌悬液）=5：2混合均匀，空白对照组不加冻干保护剂。

1.3.3 混合保护剂体系的制备

称取适量水苏糖，用去离子水溶解，直至质量浓度达到100 g/L。

称取10 g/L海藻酸钠和10 g/L羧甲基纤维素钠，分别溶解于2份水苏糖溶液中，115℃高压灭菌20 min，冷却后4℃保存备用。水苏糖海藻酸钠、水苏糖羧甲基纤维素钠。分别称取酪蛋白酸钠 5、10、50、100、150 g，溶解于 1 L 水苏糖溶液中，65℃灭菌 30 分钟，冷却，4℃保存备用，记为水苏糖酪蛋白酸钠。

1.3.4 保护剂与菌悬液的混合

取上述水苏糖溶液、水苏糖-海藻酸钠溶液、水苏糖-酪蛋白酸钠溶液、水苏糖-羧甲基纤维素钠溶液、糖冻干保护剂溶液、蛋白质冻干溶液。将保护剂溶液与菌悬液以5:2的体积比混合均匀。空白对照组为生理盐水与菌悬液按体积比5:2混合均匀，4℃保存备用。

取水苏糖酪蛋白酸钠溶液与菌悬液按体积比1:2、3:2、5:2、9:2混合均匀，4℃保存备用。

1.3.5 微胶囊的制备

采用张国芳等的方法制备微胶囊。 [14]稍作修改。将菌悬液（500 g/L）与混合保护剂（水苏糖-海藻酸钠）按体积比2:1、2:3、2:5、2:7混合，称取CaCO3加入到细菌悬浮液。将液体与水苏糖-海藻酸钠溶液使海藻酸钠与CaCO3的质量比为2:1、1:1、1:2、1:4、1:6，混合均匀，加入到大豆油中，立即添加量程80（50、100、200、300、400 μL），磁力搅拌器搅拌15 min，转速300、400、500、600 r/min。添加含有冰醋酸（HAc）的大豆油，使最终水油比为1:1、1:3、1:5、1:7、1:9，其中c(HAc):c(CaCO3)=2 ： 1.以原来的搅拌速度持续搅拌30分钟至完全凝胶化。微胶囊形成后，加入适量醋酸盐缓冲液（pH 5.5），4℃静置30分钟，水油分离。倒掉上层油相。 。离心（235 r/min）1 min，倒出上清液，重悬洗涤液并摇匀，再次离心除去油相，收集凝胶颗粒，4℃保存备用。

1.3.6菌悬液和湿微胶囊的真空冷冻干燥

分别取各保护剂、菌悬液混合物和微胶囊样品各1 mL，分装于小瓶中，置于冻干机样品室中，预冻至-50℃，保存5 h，设定一次干燥时间-30℃，干燥30h，二次干燥设置25℃，干燥20h。

1.3.7 嵌入率的计算

参考张国芳等人的方法。 [14]。取0.5 mL湿样品加入4.5 mL PBS中，涡旋直至凝胶颗粒溶解并完全释放菌体，取样品进行梯度稀释计数，采用MRS琼脂培养基倾注培养法进行活菌计数。根据公式（1）计算嵌入率：

嵌入率

(1)

式中：微胶囊悬浮液中活菌总数为微胶囊悬浮液中细菌含量与微胶囊悬浮液体积的乘积，CFU；等效初始菌悬液中的活菌总数为1mL菌悬液中的细菌含量与制备微胶囊时添加的菌悬液体积的乘积，CFU。

1.3.8 冻干成活率的计算

冻干成活率的计算如式（2）所示：

冻干存活率

(2)

式中：冻干后湿样品的活菌数为冻干前样品和冻干后复水样品的细菌含量。

1.3.9 冻干前耐酸性测定

模拟胃液的制备：用浓HCl将2g/L NaCl溶液的pH分别调至2.0、2.5、3.0，115℃高压灭菌20分钟，冷却后加入3.2g/L胃蛋白酶，过滤通过 0.22 μm 过滤器。经过滤、灭菌后，制成pH值为2.0、2.5、3.0的模拟胃液备用。

称取 0.1 mL 样品，分散于 9.9 mL 模拟胃液（pH 值为 2.0、2.5）中。 37°C 孵育 2 小时，然后将样品放入 4.5 mL PBS 缓冲液中。逐渐稀释并计数。样品的耐酸存活率按照式(3)计算:

冻干前耐酸存活率

(3)

式中：W1为0.1mL样品在10mL pH 2.0/2.5模拟胃液中处理2小时后的活菌数； W2，0.1 mL 样品中活细菌的数量。

1.3.10 冻干粉耐酸性测定

参考等人的方法。 [15]稍作修改。取5 mL模拟胃液（pH 2.0、3.0）加入小瓶中，与冻干粉混合均匀，37℃孵育2小时，然后取样至4.5 mL PBS缓冲液中。按式（4）计算缓冲液的耐酸存活率：

冻干粉耐酸成活率

(4)

式中：W2为一瓶冻干粉样品经5 mL模拟胃液处理2小时后的活菌数。

称取 0.01 g 冻干粉，将其分散于 10 mL 模拟胃液中。 37°C 孵育 2 小时，然后将样品放入 4.5 mL PBS 缓冲液中。逐渐稀释并计数。按式(5)计算缓冲液的耐酸存活率。

耐酸存活率

(5)

式中：W3为0.01g菌粉用10mL模拟胃液处理2小时后的活菌数。

1.4 数据统计与分析

所有独立实验均重复3次，结果以平均值±标准差表示。使用SPSS 16.0软件通过ANOVA（Tukey's检验）判断检验中不同组（组>3）之间的显着差异。 P2 结果与分析 2.1 潜在耐酸材料对细菌冻干存活率和耐酸性的影响

壁材本身的理化特性决定了相应益生菌产品对外界环境的抵抗力，对益生菌的保护作用具有重要影响[16]。实验中选择海藻酸钠、酪蛋白酸钠、乳清分离蛋白、羧甲基纤维素钠作为代表性保护材料，并以生理盐水作为对照。每个系统都直接冷冻干燥，以检查每种材料本身对益生菌的保护作用。影响。从表1可以看出，用pH 3.0模拟胃液处理2小时后，未加保护剂的对照组存活率仅为19.32%。海藻酸钠、酪蛋白酸钠和羧甲基纤维素钠的添加对干酪乳杆菌有不利影响。生存率明显提高，生存率分别为（86.05±3.49）%、（87.32±0.14）%、（87.70±0.40）%。这说明添加保护材料可以提高干酪乳杆菌在酸性条件下的存活率，对干酪乳杆菌具有保护作用。此外，添加保护材料的实验组在冻干过程中对干酪乳杆菌也有一定的保护作用。可能是这些保护剂的分子量较大，将细菌包埋起来，从而在一定程度上提高了细菌的质量。冷冻干燥成活率。但与 WANG 等人的研究相比。 [17]，益生菌冻干后活性损失较大，仍有改进空间。目前，通常在冻干过程中添加糖或蛋白质冻干保护剂来提高益生菌的冻干存活率。因此，需要进一步筛选适合干酪乳杆菌的冻干保护剂。

表1 潜在耐酸材料制备的干酪乳杆菌冻干粉的冻干存活率和耐酸性

表 1 干酪乳杆菌的酸度和酸度

注：同一列中不同字母表示数据间差异显着（P

保护材料冻干存活率/%耐酸存活率（pH 3.0）/%空白对照 6.98±0.57d19.32±2.57b 海藻酸钠 13.89±0.32c86.05±3.49a 酪蛋白酸钠 33.39±1.26a87.32 ±0.14a 乳清分离蛋白 5.95±0.39d7.25±0.25c 羧甲基纤维素钠 20.42±1.30b87.70±0.40a

2.2 冻干保护剂的筛选

糖类往往含有多个羟基，在冻干过程中可以取代水分子并与益生菌细胞膜表面的磷酸基团或蛋白质极性基团结合形成氢键，从而避免细胞膜完整性受到破坏以及蛋白质的功能。结构[18]。蛋白质通常被用作冻干保护剂，因为它可以在细菌表面形成蛋白质膜，维持益生菌细胞膜的稳定性，防止益生菌因细胞膜损伤而暴露于外界环境而受到影响。从而影响活性[19]。

在此基础上，选取6种糖类和7种蛋白质，探讨其在冻干过程中对益生菌活性的影响。由表2可以看出，未添加冻干保护剂的空白对照组冻干成活率仅为（9.41±0.29）%。以糖为冻干保护剂的实验组冻干成活率显着高于空白对照组。其中麦芽糊精、海藻糖和水苏糖的保护效果最好，冻干存活率分别为（70.00±2.24）%、（78.21±6.65）%和（82.63±1.88）%。使用蛋白质作为冻干保护剂，发现每种蛋白质的保护效果差异较大。其中，脱脂奶粉和花生蛋白的干酪乳杆菌冻干存活率较好，分别为（52.09±3.8）%和（35.33）%。 ±6.24)%。由上述结果可以看出，蛋白质对干酪乳杆菌的保护作用普遍比糖类差。这可能是因为糖的分子量较小，可以穿透细胞壁，与细胞膜外的某些基团结合，形成保护层。综上所述，选择水苏糖作为干酪乳杆菌的冻干保护剂，并与壁材复合，可同时提高其冻干存活率和耐酸存活率。

表2 不同类型冻干保护剂对干酪乳杆菌冻干存活率的影响

表2 干酪乳杆菌的结合率

分类的保护剂冻结生存率/％空白控制9.41±0.29e糖麦芽糖糖70.00±2.24A 45.17±3.9BCD抗性葡萄糖47.28±4.09bc 31.64±1.99d treys; y分离蛋白 2.01±0.22e 明胶 4.86±0.45e 脱脂奶粉 52.09±3.8b 豌豆蛋白 0.94±0.18e 鹰嘴豆蛋白 1.09±0.02e 花生蛋白 35.33±6.24cd 核桃蛋白 0.61±0.04e

2.3 耐酸壁材与冻干保护剂的组合对冻干成活率及耐酸性的影响

从表3可以看出，水苏糖作为冻干保护剂可以显着提高干酪乳杆菌在冻干过程中的存活率。当壁材与冻干保护剂组合时，海藻酸钠组冻干成活率为（63.78±3.68）%，酪蛋白酸钠组冻干成活率为（59.43±6.28） %，羧甲基纤维素钠组冻干成活率为（78.64±8.65）%。参考等人的方法。 [15]，用pH 2.0/3.0模拟胃液处理后，各实验组处理后的pH远高于原来的模拟胃液pH。这是因为模拟胃液与溶质的比例较低（约50:1），且溶质中含有的高浓度水苏糖中和了部分酸度，导致酸处理系统的实际pH值升高。但人体消化道内的pH浮动范围为1.8～3.0，不会发生实验中pH的变化。因此，考虑到原pH条件下活菌计数结果并非真实数据，本实验调整酸处理实验方法，将模拟胃液与溶质的比例提高至1000:1，以减少保护剂对细菌的影响。酸处理过程中的pH值。缓冲作用。另外，考虑到人体胃环境pH上限为3.0，将pH 3.0模拟胃液替换为pH 2.5模拟胃液处理，以防止缓冲引起的pH变化突破pH上限。胃环境。

表3 冻干保护剂与壁材组合对干酪乳杆菌存活率的影响

表3-剂和壁对干酪乳杆菌率的影响

注：耐酸存活率是指每瓶冻干粉样品经5 mL模拟胃液（pH 2.0、pH 3.0）处理2小时后的存活率。

实验组冻干存活率/% pH 2.0 模拟胃液处理 2 h pH 3.0 模拟胃液处理 2 h 耐酸存活率/% 处理后 pH 耐酸存活率/% 处理后 pH 空白对照组 6.98 ±0.57c0.30±0.03c2。 3719.32±2.57d3.45 .28±4.25a52.56±0.00b2.7490.35±7.02bc3.85 - .78±3.68b65.27±1.97a2.90116.39±8.93a3.99 Sugar- 59.43±6.28b65.05±3.55a2.8288.37±4.63c4.03 水苏糖-羧甲基纤维素钠 78.64±8.65a63.45±1.98a2.90104.17±9.36ab3.97

从表4可以看出，虽然三种保护剂的添加并没有显着提高细菌在pH 2.0极端条件下的存活率，但海藻酸钠组和酪蛋白酸钠组的存活率分别为（ 19.56±1.83)%和(34.16±7.18)%,显着高于空白对照组的存活率。但羧甲基纤维素钠组的存活率仅为(0.28±0.02)%，低于空白对照组。另外，对比空白对照组和水苏糖组发现，添加水苏糖作为冻干保护剂后，经pH 2.5模拟胃液处理后的存活率为（4.79±0.00）%，差异不显着。来自空白对照组。因此，水苏糖作为冻干保护剂，与海藻酸钠、酪蛋白酸钠联合使用，不仅可以提高冻干过程中细菌细胞的存活率，还可以减少酸性环境对细菌活性的影响。基于上述耐酸壁材与冻干保护剂形成的混合保护剂体系，可以将细菌细胞包埋、固化，从而在细菌细胞与外界环境之间形成物理屏障，延缓细菌细胞的损伤。外界环境对细菌细胞的影响，进一步提高冻干粉的耐酸性。

表4 冻干保护剂与壁材组合对干酪乳杆菌存活率的影响

表4-剂和壁对干酪乳杆菌率的影响

注：耐酸存活率是指0.01 g冻干粉样品经10 mL模拟胃液（pH 2.0、pH 2.5）处理2小时的存活率。

实验组冻干存活率/% pH 2.0 模拟胃液处理 2 h pH 3.0 模拟胃液处理 2 h 耐酸存活率/% 处理后 pH 耐酸存活率/% 处理后 pH 空白对照组 6.98 ±0.57c0±0a2.084.46±4.10 c2.82 水苏糖 78.28±4.25a0±0a2.004.79±0.00c2.61 水苏糖海藻酸钠 63.78±3.68b0±0a2.0319.56±1.83b2.64 水苏糖酪蛋白酸钠 59.4 3±6.28 b0±0a2.0734.16±7.18a2.66 水苏糖-羧甲基纤维素钠 78.64±8.65a0±0a2.020.28±0.02c2.61

2.4 乳化法制备干酪乳杆菌海藻酸钠微胶囊

目前研究中常采用乳化法制备海藻酸钠微胶囊，以提高细菌的耐酸性。乳化法制备的益生菌微胶囊的包封率受多种因素影响，包封率是判断微胶囊性能的重要指标。因此，优化包封工艺，提高益生菌在壁材中的包封率具有重要意义。意义[11]。从图1可以看出，在实验设定值范围内，Span 80的添加量以及海藻酸钠与CaCO3的质量比对包封率没有显着影响，而搅拌速度、菌胶比和水-在一定范围内油油比对包封率有显着影响。埋藏率有一定的影响。这可能是因为搅拌速率、菌胶比和水油比对形成的微胶囊的产率和粒径有影响，从而影响包封率[20-22]。综上，制备微胶囊的最佳工艺为：搅拌速率500 r/min、Span 80含量200 μL、m(海藻酸钠):m(CaCO3)=1:2、菌胶比1:5、水油比1:5。微胶囊制作完成后，测定部分湿微胶囊的耐酸性，冻干后测定部分湿微胶囊的耐酸性，得到干酪乳杆菌冻干粉，耐酸性为与非埋入实验组相比。

图1 不同工艺参数对微胶囊包埋率的影响

图1 的速率

注：不同字母表示数据间差异显着（P

2.5 海藻酸钠-水苏糖-干酪乳杆菌微胶囊的冻干存活率和耐酸性

从表5可以看出，冻干海藻酸钠微胶囊的存活率为(5.64±1.03)%，而冻干微胶囊经pH 2.5模拟胃液处理后干酪乳杆菌的存活率仅为(0.37)。 ±0.28)%，两者冻干成活率和冻干后耐酸成活率均显着低于未包埋实验组（即水苏糖-海藻酸钠）、包埋组（即水苏糖-海藻酸钠）和包埋组（即水苏糖-海藻酸钠）海藻酸钠微胶囊）与未包埋（水苏糖-海藻酸钠）组显着不同。糖-海藻酸钠）冻干后耐酸存活率明显低于冻干前。这可能是因为在海藻酸钠-水苏糖-干酪乳杆菌微胶囊的制备过程中，部分水苏糖残留在水相中，导致微胶囊中水苏糖的浓度降低，而在冻干过程中，降低了水苏糖的浓度。冻干保护剂的浓度会影响冻干微胶囊内细菌细胞的活性，从而降低细菌细胞的冻干存活率和耐酸性。另外，冰晶可能会破裂微胶囊表面，使细菌直接暴露于低pH环境，这也会在一定程度上影响细菌冻干后的耐酸性。在水苏糖-海藻酸钠组中，水苏糖的浓度没有变化。在冻干过程中，水苏糖作为冻干保护剂，防止细胞膜结构和功能的完整性受到破坏[18]，提高菌种质量。活性，其冻干成活率达到(63.78±3.68)%。用pH 2.5模拟胃液处理2小时后，冻干粉的耐酸存活率为（19.56±1.83）%，但明显低于冻干前的耐酸存活率。率为(51.65±3.80)%，但仍显着高于海藻酸钠微胶囊冻干后的耐酸存活率。综上所述，海藻酸钠微胶囊在制备过程中，存在冻干保护剂浓度降低、冻干后结构破坏的可能，导致冻干成活率和耐酸性下降。低于非嵌入实验组。因此，水苏糖复合耐酸壁材更适合直接与菌悬液混合冷冻干燥制备耐酸干酪乳杆菌冻干粉，但不适合包埋后冷冻干燥。

表5 海藻酸钠包埋干酪乳杆菌对冻干存活率及耐酸性的影响

表 5 - 干酪乳杆菌 - 率和酸

注：pH 2.0 和 pH 2.5 栏中不同字母表示数据差异显着（P

未包埋冻干存活率/% pH 2.0模拟胃液处理2 h pH 2.5模拟胃液处理2 h 冻干前耐酸存活率/% 冻干后耐酸存活率/% 耐酸存活冻干前率/% 冻干后耐酸存活率 存活率/% 海藻酸钠微胶囊 5.64±1.030±0a0±0a54.44±10.00a0.37±0.28c 水苏糖-海藻酸钠 63.78±3.680±0a0± 0a51.65±3.80a19.56±1.83b

2.6 真空冷冻干燥制备干酪乳杆菌耐酸冻干粉工艺优化

2.6.1酪蛋白酸钠浓度对干酪乳杆菌冻干粉冻干存活率及耐酸性的影响

由表4可见，对于相同浓度的耐酸壁材，水苏糖与酪蛋白酸钠组合对细菌的保护效果最好。因此，选择酪蛋白酸钠作为耐酸保护剂，水苏糖作为冻干保护剂，进一步研究其直接与菌悬液混合冻干制备耐酸冻干粉的工艺。 。由表6可以看出，当酪蛋白酸钠质量浓度为10g/L时，冻干干酪乳杆菌粉经pH 2.5模拟胃液处理2小时后，存活率为(34.16±7.18)%。 (表6)。这可能是因为酪蛋白酸钠浓度较高时，冻干过程中水苏糖对干酪乳杆菌的保护作用减弱，导致其耐酸性下降。

表6 酪蛋白酸钠浓度对干酪乳杆菌冻干粉冻干存活率和耐酸性的影响（0.01 g/10 mL）

[0072] 干酪乳杆菌的干燥状态和酸的表6

注：同一列中不同字母表示数据间差异显着（P

酪蛋白酸钠浓度/(g·L-1)冻干存活率/%耐酸存活率(pH 2.0)/%耐酸存活率(pH 2.5)/%5104.33±15.04a0.06±0.04a29.84± 1 ..43±6.28b0±0b34.16±7..74±3.35b0±0b9.19±0..54±3.01c0±0b11.23±1..51±1.99b0±0b9.19±1.17b

2.6.2 保护剂和菌悬液对干酪乳杆菌冻干粉冻干存活率和耐酸性的影响

基于上述实验结果，确定酪蛋白钠的质量浓度为10 g/l，质量浓度为100 g/l。制备了酪蛋白蛋白甲酸酯混合保护剂系统，并调整了保护剂系统和细菌悬浮液。液体比率。从表7可以看出，当混合保护剂与细菌悬浮液的体积比超过3：2时，冻干生存率没有显着差异，但是它们都高于冻干生存率1:1。这表明保护剂的浓度太低，无法完全保护细胞，但是太多的保护剂不会进一步提高冻干生存率。比较用不同细菌凝胶比例制备的冻干粉末的抗酸生存率，当细菌悬浮液与混合保护剂的体积比为2：5时，两组之间没有显着差异，这表明最重要的是最重要的影响抗酸性的因素可能是耐酸壁物质和保护剂的比例。以适当的比率，这两个形成了保护细菌细胞并减少酸离子对细菌细胞的损害的最合适结构。从表7可以看出，蛋白酶蛋白酶蛋白酶 - 甲状腺乳杆菌壳的最佳制备过程是抗耐酸的冷冻粉末的最佳制备过程是：混合保护剂系统中生蛋白的质量浓度为10 g/l，质量为质量浓度的浓度为100 g/l。包含500 g/l湿细菌泥的细菌悬浮液与混合保护剂系统的体积比为2：5，并真空冷冻干燥以制备耐酸的冷冻干燥粉末。

表7保护剂与细菌悬浮剂的比率对乳酸杆菌壳冰冻冻干粉末的冷冻干燥生存率和抗酸的影响（0.01 g/10 mL）

表7的表7，均叶乳杆菌的速率和酸

细菌凝胶体积比冻干生存率/耐酸的生存率（pH 2.0）/％抗酸的生存率（pH 2.5）/％2：147.59±1.63b0.23±0.11a32.32.35.11a32.35±2.17ab2： 356.41±9.51AB0。 01±0.01b28.3±1.31ab2：559.43±6.28ab0±0b34.16±7.18a2：964.66±9.73a0±0b27.97.97±0.77ab

3 结论

藻酸钠，酪蛋白钠和羧甲基纤维素作为抗酸嵌入材料，都可以在酸性条件下提高乳杆菌壳冰冻粉末的存活率，但是它们的冷冻干燥保护对细菌的冻干保护效果很小。 。与其他糖和蛋白质保护剂相比，具有更好的细菌细胞冷冻干燥特性。将与藻酸钠和酪蛋白钠结合在一起可以同时改善细菌细胞的冻干。生存能力和抗酸性。尽管用石膏和乳杆菌作为核心材料和藻酸钠作为壁材料制备的微胶囊可以显着提高细菌的酸耐药性，但在冻干后冷冻干燥的存活率和微胶囊的抗酸性低于未备件的微胶囊的酸度耐药性。 。胶囊组，表明微胶囊的制备不适用于制备耐酸冻干粉末。保护剂和耐酸壁材料的直接复合是制备抗酸性冻干粉末乳杆菌壳的有效方法。

参考

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