磷酸钙共沉淀：一种普遍但有局限性的转染方法

磷酸钙共沉淀：一种普遍但有局限性的转染方法

磷酸钙共沉淀法自20世纪70年代初问世以来，一直是一种流行的转染方法，因为共沉淀所需的成分易得且价格低廉（van der Eb和1973）。此外，该技术易于掌握，对多种培养细胞类型都有效，可用于多种培养细胞类型的瞬时和稳定转染。然而，磷酸钙共沉淀法对pH、温度和缓冲盐浓度的细微变化很敏感，易产生变异，并且对多种细胞培养类型，尤其是原代细胞有细胞毒性。另外，该方法不适用于将核酸体内转移到动物体内，与脂质体介导的转染等其他化学转染方法相比，转染效率相对较差。

磷酸钙共沉淀的原理是将 DNA 与氯化钙在缓冲盐/磷酸盐溶液中混合，形成磷酸钙-DNA 共沉淀物，然后分散到培养细胞上。磷酸钙有助于共沉淀物中凝聚的 DNA 与细胞表面结合，DNA 通过内吞作用进入细胞。在添加 DNA-氯化钙溶液的同时给磷酸盐缓冲液充气有助于确保形成最细的沉淀物，这一点非常重要，因为 DNA 团块不会有效地粘附或进入细胞。